Forskjellen mellom nitrocellulose og nylonmembran
Share
De hovedforskjell mellom nitrocellulose og nylonmembran er det nitrocellulosemembran har en høy affinitet for proteinbinding mens nylonmembranen har en høy affinitet for nukleinsyrebinding. Videre binder hydrofobe og elektrostatiske interaksjoner makromolekyler til nitrocellulosemembranene, mens ioniske, hydrofobe og elektrostatiske interaksjoner binder makromolekyler til nylonmembranene
Nitrocellulose og nylonmembran er to typer membraner som makromolekylene overføres fra gelen. Imidlertid kan nitrocellulose membraner brukes til å binde DNA og RNA også.
Nøkkelområder dekket
1. Hva er et Nitrocellulose Membran
- Definisjon, struktur, bindingsmekanisme, fordeler
2. Hva er et nylonmembran
- Definisjon, struktur, bindingsmekanisme, fordeler
3. Hva er likhetene mellom nitrocellulose og nylonmembran
- Oversikt over vanlige funksjoner
4. Hva er forskjellen mellom nitrocellulose og nylonmembran
- Sammenligning av nøkkelforskjeller
Nøkkelord
Affinity, Biodyne A, Biodyne B, Nitrocellulose, Nucleic Acids, Nylon, Pore Size, Proteins
Hva er et Nitrocellulose Membran
Nitrocellulose membran er en vanlig matrise som brukes i Western blotting på grunn av den høye proteinbindende affiniteten. Det kan imidlertid brukes til å oppdage nukleinsyrer bortsett fra immobiliserte proteiner og glykoproteiner. Immobiliseringen av makromolekylene skjer hovedsakelig ved hydrofobe interaksjoner. Hydrogenbindinger dannes også mellom nitrogruppene i membranen og aminosyre sidekjeder av proteiner. Protein immobilisering vil være høy i høyt salt og lav metanol konsentrasjon.
Figur 1: Blotprinsipp
Nitrocellulose membraner er tilgjengelig i 100% rene former av nitrocellulose med høy overflate, som er jevn. De tilgjengelige forstørrelsene er 0,2 μm og 0,45 um. Den lille porestørrelsen er bedre for bindingen med små proteiner (<14 kDa). The binding and retaining capacity of proteins is 80-250 μg/cm2. De forhåndsmonterte membranene er klare til bruk. En av de viktigste fordelene ved nitrocellulose membraner er den svært lave bakgrunnen som den lett kan blokkeres. De støttede nitrocellulose membranene kan strippes og reprobedes.
Hva er et nylonmembran
Nylonmembran er en mye brukt matrise for binding av nukleinsyrer. Nylonmembraner er mekanisk sterke enn nitrocellulose membraner. De to hovedtyper av nylonmembraner som brukes ved blotting, er Biodyne A og Biodyne B. Porestørrelsen til begge typer er 0,45 um. De er motstandsdyktige mot varme og løsemidler. Også, de vil ikke krympe, knekke eller rive. Begge gir en lav bakgrunn enn nitrocellulose membraner.
Figur 2: Southern Blot Membrane
- Biodyne A består av umodifisert nylon 66. Høy følsomhet og utmerket oppløsning er fordelene med Biodyne A. Siden Biodyne A inneholder både positive og negative ladninger, kan den brukes til å binde mange typer makromolekyler.
- Biodyne B består av positivt ladet nylon 66. Derfor har den en utmerket bindingskapasitet for negativt ladede nukleinsyrer slik som DNA og RNA.
Likheter mellom nitrocellulose og nylonmembran
- Nitrocellulose og nylonmembraner er to typer membraner som brukes til å overføre makromolekyler fra gelen i blottingsteknikker.
- De tillater deteksjon av makromolekyler på membranen.
- Begge typer membraner kan brukes til å overføre nukleinsyrer.
- De kan bli strippet og reprobed.
Forskjellen mellom nitrocellulose og nylonmembran
Definisjon
Nitrocellulose membran refererer til en klebrig membran som brukes til immobilisering av nukleinsyrer og proteiner i blotting mens nylonmembran refererer til en type membran med høy styrke og varmebestandighet som brukes til å immobilisere makromolekyler.
Består av
Nitrocellulose membraner består av nitrert cellulose mens nylon membraner består av umodifisert eller positivt ladet Biodyne A og Biodyne B nylon.
Pore Size
Porestørrelsene av nitrocellulose membraner er 0,2 μm og 0,45 μm mens porestørrelsen til nylonmembranene er 0,45 μm.
Styrke
Nitrocellulose membraner er sprø og dermed ikke gjenbrukbare mens nylon membraner er mekanisk sterke.
Overføringsmetode
Elektroforetisk overføring brukes hovedsakelig ved overføring av proteiner til nitrocellulose membranene, mens kapillær overføring er vanlig praksis med nylon membraner.
Affinitet
Nitrocellulose membraner har høy affinitet til protein mens nylonmembraner har høy affinitet til nukleinsyrer. Nitrocellulose membraner kan også brukes til nukleinsyrer.
blotting
Nitrocellulose membraner er bedre for Western blotting mens nylon membraner er bedre for Southern og Northern Blotting.
Bindende interaksjoner
Hydrofobe og elektrostatiske interaksjoner binder makromolekyler til nitrocellulosemembranene mens ioniske, hydrofobe og elektrostatiske interaksjoner binder makromolekyler til nylonmembranene.
Proteinbindende kapasitet
Proteinbindende kapasitet av nitrocellulosemembranen er 80-250 μg / cm2 mens proteinbindingsevnen til nylonmembranen er 150-200 μg / cm2.
Konklusjon
Nitrocellulose membran er en sprø membran som hovedsakelig brukes til å immobilisere protein i Western blotting mens nylonmembranen er en sterk membran som hovedsakelig brukes til å immobilisere nukleinsyrer. Nitrocellulose membranene binder molekyler gjennom hydrofobiske interaksjoner mens nylonmembranene binder molekyler gjennom elektrostatiske interaksjoner. Derfor er hovedforskjellen mellom nitrocellulose og nylonmembran affiniteten.
Henvisning:
1. "Nitrocellulose Membranes for Western Blotting Thermo Fisher Scientific - LK. "Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, tilgjengelig her
2. "Biodyne A Nylon Membrane, 0,45 m, 8 Cm x 12 Cm." Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, tilgjengelig her
3. "Biodyne B Nylon Membrane, 0,45 m, 8 Cm x 12 Cm." Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, tilgjengelig her
Bilde Courtesy:
1. "Blot biology" Av Gbdivers - Eget arbeid (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia
2. "Southern blot membran" Av Bojan Žunar - Eget arbeid (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia
