Forskjellen mellom nitrocellulose og PVDF
Share
Nøkkelforskjell - Nitrocellulose vs PVDF
Western blotting er en metode som tillater deteksjon og kvantifisering av spesifikke proteiner fra en proteinprøve. Teknologiens pålitelighet avhenger av valget av en korrekt membran for absorpsjon av proteiner fra gelen. Det finnes forskjellige typer mikroporøse membraner. Nitrocellulose og PVDF membraner er to slike membraner foretrukket av forskerne på grunn av deres spesielle egenskaper over de andre typer membraner. Utvalget mellom nitrocellulose eller PVDF er også en annen utfordring i western blotting. Både nitrocellulose og PVDF har en høy proteinabsorpsjonskapasitet. Hovedforskjellen mellom nitrocellulose og PVDF-membran er det nitrocellulosemembraner har ikke evne til å fjerne antistoffer og gjenbruk av membranen for reprobering av antistoff mens PVDF-membraner har stripping og gjenbruk av evne.
INNHOLD
1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er Nitrocellulose
3. Hva er PVDF
4. Side ved side sammenligning - Nitrocellulose vs PVDF
5. Sammendrag
Hva er Nitrocellulose?
Nitrocellulose er en polymer produsert ved å behandle cellulose med salpetersyre og brukes til å lage mikroporøse membraner i molekylærbiologi, spesielt for blottingsteknikker som sørlige, nordlige og vestlige blotting. Porestørrelser av nitrocellulose membraner varierer fra 3 til 20 μm. Nitrocellulose mikroporøse membraner letter deteksjonen av immunokjemisk reaksjon som skjer på overflaten av membranen. Derfor brukes nitrocellulose membraner ofte for immobilisering av proteiner og påvisning av spesifikke proteiner i western blotting. Nitrocellulose membraner kan også immobilisere glykoproteiner og nukleinsyrer.
Nitrocellulose membraner foretrekkes i sidestrøm-analyser på grunn av flere trekk. Nitrocellulose membraner absorberer proteiner med høy konsentrasjon. Løsningsmidlet som brukes til å vaske membranen, reduserer ikke nitrocellulosemembranproteinabsorpsjonen. Nitrocellulose membraner kan enkelt kuttes til ønsket gelstørrelse og overføre proteiner fra gelen til membranen ved elektrisk eller kapillær overføring. Nitrocellulose tillater raskere flyt av proteiner gjennom membranen med høyt bindingspotensial. Nitrocellulose viser en forbedret håndteringsstyrke. En annen spesiell egenskap av nitrocellulose membran er at den lett kan limes med ikke-løsningsmiddel vannavstøtende lim på ulike plastlagringer.
Figur 01: Nitrocellulose membran for western blotting
Hva er PVDF?
Polyvinyliden-difluorid (PVDF) er fluoropolymer produsert ved polymerisasjon av vinyliden-difluorid og har en høy immobiliseringsevne for proteiner. Derfor brukes mikroporøse membraner laget av PVDF i western blotting teknikker for å analysere spesifikke proteiner fra blandingene av proteiner. PVDF-membraner kan også brukes til aminosyreanalyse og proteinsekvensering. Den viktigste egenskapen til PVDF membran over nitrocellulose membran er at den lett kan strippes av antistoffene og gjenbrukes for påfølgende antistoffprober.
PVDF membraner er tykkere enn nitrocellulose membraner; dermed mer motstandsdyktig mot skader under gjenbruk. PVDF membraner er svært hydrofobe. Derfor må de være fuktet i metanol eller isopropanol før bruk.
Hva er forskjellen mellom nitrocellulose og PVDF?
Nitrocellulose vs PVDF | |
| Nitrocellulose er en polymer sammensatt av cellulose. | PVDF er en fluoropolymer produsert ved polymerisasjonen av vinyliden-difluorid. |
| Membranporestørrelse | |
| Typiske porestørrelser er 0,1, 0,2 eller 0,45μ | Typiske porestørrelser er 0,1, 0,2 eller 0,45 um |
| Proteinbindende kapasitet | |
| Nitrocellulose har en proteinbindende kapasitet på 80 til 100 μg / cm2. | PVDF har en proteinbindende kapasitet på 170 til 200 μg / cm2. |
| Følsomhet | |
| Dette har lav følsomhet i forhold til PVDF. | Dette har høy følsomhet. |
| Påvisning av lavproteinproteiner | |
| Siden følsomheten er lav i nitrocellulosemembraner, er den ikke egnet for påvisning av lavt uttrykte proteiner. | Dette er mer egnet for påvisning av lavt uttrykte proteiner på grunn av sin høye følsomhet. |
| Bakgrunnsstøy | |
| Dette har lavere bakgrunnsstøy | Dette har høyere bakgrunnsstøy. |
| Interaksjoner med proteiner | |
| Proteinmolekyler binder til nitrocellulose membraner gjennom hydrofobe interaksjoner. | Proteiner binder til PVDF-membraner gjennom hydrofobe og dipol-interaksjoner. |
| Membranens natur | |
| Nitrocellulose er sprø og skjør. Men versjoner av nitrocellulose er tilgjengelige, og de er resistente. | PVDF er mer holdbar og har høyere kjemisk resistens. |
| Evne til å stripe og gjenbruke | |
| Nitrocellulose kan ha problemer med stripping og reprobing uten å miste signalet. | PVDF er ideell for reprobing og sequencing applikasjoner. |
| Egnethet | |
| Nitrocellulose er ideell for å oppdage proteiner med lav molekylvekt. | PVDF er mer egnet for å påvise proteiner med høy molekylvekt. |
| Andre bruksområder | |
| Nitrocellulose kan brukes til nukleinsyreanalyse og dot / slot-blotting. | PVDF kan brukes til proteinsekvensering og fastfaseanalysesystemer. |
| Koste | |
| Dette er billigere enn PVDF membraner. | Dette er dyrere enn nitrocellulose membraner. |
| Behov for forvetting | |
| Nitrocellulose membraner krever ikke presoaking med metanol | PVDF membraner krever presoaking med metanol. |
Sammendrag - Nitrocellulose vs PVDF
Nitrocellulose membraner var de første membranene som ble brukt kommersielt for lateral strømningsanalyse. De har en høy kapasitet til å absorbere proteiner. Derfor brukes nitrocellulose membraner i western blotting. PVDF er en annen type membran som brukes i western blotting, og den har også en høy proteinabsorpsjonskapasitet. Begge typer brukes i western blotting for proteinanalyse. Imidlertid har PVDF membraner mer spesielle egenskaper, noe som gjør dem mer egnet enn nitrocellulose membraner for western blotting. Men nitrocellulose membraner er mer egnet for å detektere lavmolekylære proteiner, PVDF-membraner er mer egnet for å påvise høymolekylære proteiner. Dette er forskjellen mellom nitrocellulose og PVDF membraner.
Bilde Courtesy:
1. "Western blot transfer" Av Bensaccount på engelsk Wikipedia (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia
Henvisning:
1.Luque-Garcia, Jose L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun og Thomas A. Neubert. "Bruk av nitrocellulose membraner for proteinkarakterisering ved hjelp av matrisassistert laser desorption / ionisering massespektrometri." Analytisk kjemi. U.S. National Library of Medicine, 15. juli 2006. Web. 28. mars 2017
2. "Molekylære markører og plantebioteknologi." Google Bøker. N.p., n.d. Web. 28. mars 2017
3.Monday, 8. april 2013 Tweet. "Magic's In the Membrane: Velg klokt for Best Western Blot Resultater." Biocompare. NP., 08. Apr. 2013. Web. 28. mars 2017
