Forskjellen mellom direkte og indirekte ELISA
Share
Nøkkelforskjell - Direkte mot indirekte ELISA
En enzymbundet immunoassay (ELISA), også kjent som enzymimmunoassay, er en serologisk test som oppdager antistoffer i blodet. Det brukes som et diagnostisk verktøy for å finne ut om pasienten har blitt utsatt for en bestemt type virus eller et annet smittsomt middel (antigen) og om kroppen har produsert antistoffer mot infeksjonen. ELISA kan også identifisere tidligere og nåværende infeksjoner. Derfor er ELISA ofte brukt som en prescreening test av legene før en grundig analyse av sykdommer. Denne testen kan utføres i laboratoriet ved å ta en blodprøve fra pasienten. Det er to typer ELISA-test: direkte ELISA og indirekte ELISA. Hovedforskjellen mellom direkte og indirekte ELISA er det indirekte ELISA er mer sensitiv og krever tilsetning av et sekundært antistoff samtidig som direkte ELISA er mindre følsom og bruker bare et primært antistoff.
INNHOLD
1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er direkte ELISA
3. Hva er Indirekte ELISA
4. Side ved side-sammenligning - Direkte mot indirekte ELISA
5. Sammendrag
Hva er direkte ELISA?
ELISA er en sykdomsdiagnostisk test utført for å identifisere tilstedeværelsen av bestemte antigener eller antistoffer i blodet. Det er gjort som en plateanalyse. Det bruker antistoffer knyttet til enkelt analyserte enzymer. Antigenens tilstedeværelse i serumprøven binder med spesifikke antistoffer knyttet til enzymer. I det siste trinnet tilsettes et spesifikt substrat for å reagere med enzymet. Enzymet konverterer substratet til et farget eller signalproducerende produkt. Fargeskiftet i kjemisk substrat avslører nærværet av et bestemt antistoff i serumprøven. Direkte ELISA-test bruker bare et primært antistoff koblet til enzymet. Ved binding til antigenet endrer det raskt fargen, noe som indikerer tilstedeværelsen av det smittefarlige middel i blodet. Imidlertid er intensiteten av signalene svakere i direkte ELISA siden epitoper er begrenset til binding av antigenene. Derfor er direkte ELISA mindre sensitiv sammenlignet med indirekte ELISA.
Figur 01: Direkte ELISA-test
Hva er Indirekte ELISA?
ELISA kan utføres ved bruk av to typer antistoffer nemlig; primært antistoff og sekundært antistoff. Indirekte ELISA-verktøy bruker begge typer antistoffer til å forsterke signalene for bedre deteksjon. Indirekte ELISA-teknikk utføres som følger.
- Plater inkuberes med antigener og vaskes for å blokkere ikke-spesifikk binding.
- Deretter blir primære antistoffer tilsatt og vasket.
- Enzymbundet sekundært antistoff blir tilsatt og vasket.
- Et substrat tilsettes og får reagere med enzymer.
- Signaler blir detektert, og tilstedeværelsen eller fraværet av det spesifikke antigenet i prøven er identifisert.
I indirekte ELISA-test kan flere sekundære antistoffer binde til et enkelt primært antistoff. Sekundære antistoffer er koblet til enkelt analyserte enzymer. Derfor kan en binding gi et sterkt signal på grunn av mer enn en interaksjon. Derfor er indirekte ELISA mer følsom enn direkte ELISA. Imidlertid kan indirekte ELISA gjøre uspesifikke signaler på grunn av kryssreaksjoner av sekundære antistoffer.
Figur 02: Indirekte ELISA-test
Hva er forskjellen mellom direkte og indirekte ELISA?
Direkte mot indirekte ELISA | |
| Direkte ELISA er mindre følsom sammenlignet med indirekte ELISA. | Indirekte ELISA er mer følsom. |
| Tid tatt | |
| Direkte ELISA-test er en rask prosess. | Indirekte ELISA er tidkrevende. |
| Bruk av antistoffer | |
| Bare én type antistoffer (primære antistoffer) brukes i direkte ELISA. | Primær og sekundær antistoffer brukes til indirekte ELISA. |
| Link med enzymer | |
| Primære antistoffer er knyttet til enzymer. | Sekundære antistoffer er knyttet til enzymer. |
| Kryssreaktivitet av andre antistoffer | |
| Direkte ELISA eliminerer kryssreaktiviteten til andre antistoffer. | Indirekte ELISA påvirkes med kryssreaktivitet av andre antistoffer. |
| signaler | |
| Signaler er svake sammenlignet med indirekte ELISA. | Signaler forsterkes i indirekte ELISA. Det er derfor lett å oppdage. |
Sammendrag - Direkte mot indirekte ELISA
ELISA er en biokjemisk teknikk som hovedsakelig brukes i immunologi for å oppdage nærvær av et antistoff eller et antigen i en blodprøve av en pasient. Det kan utføres via to prosesser kjent som direkte eller indirekte ELISA. Direkte ELISA-test bruker bare primære antistoffer for å oppdage antigenet mens indirekte ELISA bruker både primære og sekundære antistoffer. I direkte ELISA er primære antistoffer merket mens i indirekte ELISA sekundære antistoffer er merket. Dette er forskjellen mellom direkte og indirekte ELISA.
referanser
1. "Den enzymbundne immunosorbentanalysen (ELISA)." Bulletin of the World Health Organization. U.S. National Library of Medicine, 1976. Web. 29. mars 2017
2. Loon, A. M van, J.T. Van Der Logt, F.W. Heessen og J. Van Der Veen. "Enzymbundet immunosorbentanalyse som bruker merket antigen for påvisning av immunoglobulin M- og A-antistoffer i toksoplasmose: Sammenligning med indirekte immunofluorescens og dobbelt-sandwich-enzymbundet immunosorbentanalyse." Journal of Clinical Microbiology. U.S. National Library of Medicine, juni 1983. Web. 29. mars 2017
Bilde Courtesy:
1. "ELISA diagram" Av Cavitri - Eget arbeid (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia
2. "Indirekte ELISA" Av Cawang - Eget arbeid (CC0) via Commons Wikimedia
