Forskjellen mellom direkte og indirekte immunfluorescens

De nøkkelforskjell mellom direkte og indirekte immunofluorescens er at direkte immunofluorescens bruker et enkelt antistoff som virker mot målet av interesse, mens den indirekte immunofluorescensen bruker to antistoffer til å markere målet av interesse.

Immunofluorescens eller cellebilder er en teknikk som brukes til å merke et bestemt målantigen med en fluorofor. Her er fluoroforen en fluorescerende kjemisk forbindelse som kan gi igjen lys på lys excitasjon. Når en fluorofore binder med målantigenet, tillater det deteksjon av målmolekylet i prøven. For å beskrive det videre, når et antigen binder med et spesifikt antistoff, kan det bli konjugert med fluorforer. Det er derfor lett å oppdage nærværet av målantigenet i prøven når det observeres under fluorescensmikroskopet.

Dessuten er det to typer immunofluorescens; direkte og indirekte immunofluorescens. Forskjellen mellom direkte og indirekte immunofluorescens ligger hovedsakelig i antall antistoffer som brukes og fluorforkonjugasjonen. Det vil si i direkte immunofluorescens, fluoroforen direkte konjugerer til det primære antistoffet mens det indirekte immunofluorescens, fluoroforkonjugatet med det sekundære antistoffet.

INNHOLD

1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er direkte immunfluorescens
3. Hva er indirekte immunfluorescens
4. Likheter mellom direkte og indirekte immunfluorescens
5. Side ved side-sammenligning - Direkte mot indirekte immunfluorescens i tabellform
6. Sammendrag

Hva er direkte immunfluorescens?

Immunofluorescens bruker antistoffer til å oppdage bestemte målantigener. Direkte immunofluorescens er en av de to typer immunofluorescens. Ved direkte immunofluorescens involverer et enkelt antistoff (primært antistoff) og fluoroforen direkte konjugerer med det primære antistoff. Ved binding av antistoffet med målantigenet, utsender fluorofor fluorescens som kan detekteres av et fluorescensmikroskop.

Figur 01: Direkte immunfluorescens

Imidlertid er direkte immunofluorescens en dyr metode siden de primære konjugerte antistoffene er kostbare sammenlignet med de sekundære antistoffene. Ikke desto mindre involverer det ikke et ekstra trinn, derfor en kortere teknikk. Videre reduseres ikke-spesifikke bindinger i direkte immunofluorescens. Derfor er arten kryssreaktivitet lav. Men ved gjenkjenning er sensitiviteten til den direkte immunofluorescens svak i forhold til den indirekte immunfluorescens .

Hva er indirekte immunfluorescens?

Indirekte immunfluorescens er den andre type immunofluorescens som involverer to typer antistoffer, slik som primære og sekundære antistoffer i merkingen av målantigenet. I denne metoden konjugerer fluoroforen med det sekundære antistoffet. Derfor innebærer denne teknikken et ekstra trinn.

Figur 02: Immunofluorescens

Følsomheten er imidlertid høy i denne metoden, da flere fluorforer kan konjugeres til sekundære antistoffer, og det gjør deteksjonen enklere. Videre er indirekte immunofluorescens billigere på grunn av det faktum at konjugasjonen av sekundære antistoffer er billigere og lettere. I sammenligning med den direkte immunofluorescensen er arten kryssreaktivitet høy i den indirekte metoden.

Hva er likhetene mellom direkte og indirekte immunfluorescens?

• De er to typer immunfluorescens teknikk.
• Primærantistoffer og fluorofor involverer i begge metoder.
• Også antigen-antistoffreaksjonen skjer i begge metoder.
• Videre benytter både direkte og indirekte immunofluorescens et fluorescensmikroskop for påvisning av antigen.

Hva er forskjellen mellom direkte og indirekte immunfluorescens?

Immunofluorescens kan være direkte eller indirekte basert på fluorofore-konjugasjonen med antistoffene som anvendes. I direkte immunofluorescens, konjugerer fluoroforen med det primære antistoffet, som er det eneste antistoff som involverer i denne teknikken. I motsetning til det, i indirekte immunofluorescens, konjugerer fluoroforen med det sekundære antistoffet, som er en av de to typer antistoffer som involverer i teknikken. Derfor er hovedforskjellen mellom direkte og indirekte immunofluorescens antistofftype som konjugerer med fluoroforen.

Følgende infographic gir en side ved side sammenligning av forskjellen mellom direkte og indirekte immunofluorescens.

Sammendrag - Direkte mot indirekte immunfluorescens

Immunofluorescens er en teknikk som brukes til å oppdage nærvær av spesifikke antigener i en prøve. Denne teknikken bruker spesifikke antistoffer. Derfor, i dette, konjugerer antistoffene med fluorforer for å oppdage dem ved bruk av et fluorescerende mikroskop. Videre er det to typer immunofluorescens, nemlig direkte og indirekte immunofluorescens. Direkte immunofluorescens involverer et enkelt antistoff og fluorofor direkte konjugert til dette antistoffet. Indirekte immunofluorescens involverer to antistoffer; primær og sekundær og fluorofor konjugert til det sekundære antistoffet. Siden flere sekundære antistoffer kan binde med et primært antistoff og flere fluorforer kan konjugere med sekundære antistoffer, er indirekte immunofluorescens en mer sensitiv metode enn den direkte metoden. Videre er den indirekte metoden billigere enn den direkte metoden. Dermed er dette forskjellen mellom direkte og indirekte immunofluorescens.

Henvisning:

1. "Immunofluorescens." Wikipedia, Wikimedia Foundation, 19. august 2018. Tilgjengelig her 

Bilde Courtesy:

1. "HSP IF IgA" Av Emmanuelm på en.wikipedia, (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia
2. "Immunofluorescence" Av Westhayl618 - Eget arbeid, (CC BY-SA 4,0) via Commons Wikimedia