Hvordan virker trypsin i cellekultur

Trypsin er en serinprotease som klipper lysin og argininrester ved C-terminalen av peptider. Det er det mest brukte enzymet i cellekultur for å frigjøre de vedheftende celler fra kulturbeholderoverflater. Trypsin tolereres lett av de fleste celletyper som dyrkes i kulturer. Dens aktivitet kan lett nøytraliseres ved tilsetning av serum i kulturmediet. Disse to funksjonene av trypsin letter deres bruk i cellekulturer. Generelt sett blir trypsin tilsatt til cellekulturer med EDTA. Rollen av trypsin i cellekulturer er beskrevet i denne artikkelen.

Nøkkelområder dekket

1. Hva er Trypsin
     - Definisjon, Funksjoner, Funksjon
2. Hvordan virker trypsin i cellekultur
     - Rolle av trypsin i cellekultur

Nøkkelbetingelser: Adhesive Proteins, Cell Adhesion, Digestive Enzyme, Trypsin, Trypsinisering

Hva er Trypsin

Trypsin er et fordøyelsesenzym som bryter ned proteiner i fordøyelsessystemet hos mange vertebrater. Det finnes i bukspyttkjertelen juice. Trypsin spalter lysin og argininrester av karboksy-terminalen av peptider. Det klipper imidlertid ikke dem når disse to aminosyrene blir fulgt av praline. Aktiviteten av trypsin brukes i mange bioteknologiske prosesser, og virkningen av trypsin er kjent som trypsinering eller trypsinproteolyse. Krystallstrukturen av trypsin er vist i Figur 1.

Figur 1: Trypsin

Den optimale pH for virkningen av trypsin er 7,6-8,5. Generelt benyttes fenolrød i trypsinanalyser for å overvåke ovennevnte pH-område. Fenol rød gir en rosa farge i dette pH-området. Trypsinanalyser utføres på tøris. 

Hvordan virker trypsin i cellekultur

Proteinene på plasmamembranen er ansvarlige for et bredt spekter av funksjoner som er essensielle for opprettholdelsen av den normale fysiologiske aktiviteten til cellen. Noen plasmamembranproteiner som kadherinfamilier er klebende proteiner som tjener som ankre, som knytter cytoskeletproteinene til den ekstracellulære matriksen. Dette hjelpemidler i celleadhesjon og celleoverføring. Klæbemiddelproteinene i plasmamembranen er vist i figur 2.

Figur 2: Cell Adhesive Proteins

I cellekulturer kan trypsin tilsettes til mediet for å frigjøre de adherente celler fra dyrkningsbeholderoverflaten ved å fordøye de klebende proteiner. Trypsin frigjør også celler fra aggregater gjennom fordøyelsen av klebende proteiner. EDTA blir også tilsatt til cellekulturer sammen med trypsin for å chelatere divalente ioner i mediet. Kalsium- og magnesiumioner kan hemme virkningen av trypsin. Til slutt bidrar trypsin til å skaffe individuelle celler fra cellekulturer, forenkling av nedstrøms behandling av cellene.

Konklusjon

Trypsin er et fotolytisk enzym som fordøyer peptider. Trypsin blir mye brukt i cellekultur for å oppnå individuelle celler som trypsin fordøyer klebemiddelproteinene og frigjør cellene i mediet.

Henvisning:

1. "Trypsin-inducert proteomendring under cellesubkultur i mammale celler." Journal of Biomedical Science, BioMed Central, 11. mai 2010, Tilgjengelig her.

Bilde Courtesy:

1. "1UTN" Av bruker: DrKjaergaard - Eget arbeid: Fra PDB-fil 1UTN. Opprettet med PyMol (Public Domain) via Commons Wikimedia
2. "Cell Adhesion" Av ZabMilenko på English Wikipedia - Overført fra en.wikipedia til Commons by Premeditated Chaos ved hjelp av CommonsHelper (Public Domain) via Commons Wikimedia