Forskjellen mellom sørlige nordlige og vestlige blotting

De hovedforskjell mellom sørlige nordlige og vestlige blotting er det Southern blotting involverer identifikasjon av DNA, og Northern Blotting involverer identifisering av RNA, mens Western blotting involverer identifisering av proteiner.

Sør, Nord og Vest er tre blotting teknikker som brukes til å oppdage et bestemt DNA, RNA eller protein molekyl i en prøve. Under blotting overføres makromolekylene til en membran fra gelen og gjøres til å binde med en spesifikk nukleinsyre eller antistoff som støtter deteksjonen.

Nøkkelområder Dekket

1. Hva er Southern Blotting
     - Definisjon, prosess, applikasjoner
2. Hva er Northern Blotting
     - Definisjon, prosess, applikasjoner
3. Hva er Western Blotting
     - Definisjon, prosess, applikasjoner
4. Hva er likhetene mellom sørlige nordlige og vestlige blotting
     - Oversikt over vanlige funksjoner
5. Hva er forskjellen mellom sørlige nordlige og vestlige blotting
     - Sammenligning av nøkkelforskjeller

Nøkkelord

Antistoff, DNA, Elektroforese, Northern Blotting, RNA, Proteiner, Southern Blotting, Western Blotting

Hva er Southern Blotting

Southern blotting er teknikken som brukes til å detektere en bestemt DNA-sekvens i en blanding av DNA. De grunnleggende trinnene i en Southern blot er som nedenfor.

elektroforese - Det separerer DNA-prøven i forskjellige bånd basert på størrelsen ved gelelektroforese.

Overføre - Under overføringen plasseres en nitrocellulose-membran i kontakt med gelen, og DNA-bånd beveger seg på membranen gjennom kapillærvirkningen. 

Påvisning av bestemte sekvenser - Målsekvensen på membranen hybridiseres med den spesifikke, merkede oligonukleotidsekvens som kalles hybridiseringsproben. Hybridiseringsproben er kort, 100-500 bp i størrelse, enkeltstrenget DNA-molekyl. Strenghet, som avhenger av temperaturen og saltkonsentrasjonen av hybridiseringsbufferen, påvirker hybridisering. Høy strenghet definert av høy temperatur og lav salt konsentrasjon øker hybriditetenes spesifisitet, mens lav stringens definert ved lav temperatur og høy salt konsentrasjon reduserer spesifisiteten.

Figur 1: Southern Blotting

Hovedformålet med Southern blotting er å oppdage en bestemt DNA-sekvens i en prøve. Teknikken brukes i DNA fingeravtrykk, faderskap testing, offer identifikasjon og kriminell identifikasjon. Det hjelper også ved identifisering av bestemte gener, i RFLP (restriksjon fragment lengde polymorfi), mutasjon og identifikasjon av genomretting, genetiske sykdommer og smittsomme midler.

Hva er Northern Blotting

Northern blotting er teknikken som brukes til å oppdage et bestemt RNA i en blanding av RNAer. De grunnleggende trinnene i en Northern Blot er som nedenfor.

elektroforese - Det skiller RNA-prøven i henhold til størrelsen i forskjellige bånd.

Overføre - Ved kapillarvirkning overføres RNA-bånd i gelen til membranen.

Påvisning av bestemte sekvenser - Mål-RNA-sekvensen detekteres ved hybridisering med en merket oligonukleotidprobe bestående av DNA.

Figur 2: Northern Blotting

Siden Northern Blotting kan identifisere spesifikk RNA-sekvens i en prøve, kan den brukes i genekspresjonsstudiene. Det kan også hjelpe til med sykdomsdiagnose.

Hva er Western Blotting

Western blot er en blottingsteknikk som brukes til å oppdage en bestemt aminosyresekvens i en blanding av proteiner. De grunnleggende trinnene i et Western Blot er som nedenfor.

elektroforese - Individuelle proteiner separeres basert på størrelsen i band ved SDS PAGE.

Overføre - Proteinbånd i gelen overføres til en membran ved blotting.

Påvisning av spesifikke proteiner - Membranen med separerte proteiner inkuberes med et primært antistoff som bare binder til det spesifikke proteinet. Et sekundært antistoff, som er merket med et enzym som pepperrotperoxidase (HRP) eller alkalisk fosfatase, brukes til å detektere det primære antistoffet. Når den inkuberes med substratet, visualiserer enzymvirkningen bindingen av antistoffer mot en spesifikk region på membranen.

Figur 3: Western Blotting

Western blotting kalles også protein blot eller immunoblotting. Det kan identifisere antall proteiner i en prøve, forekomst av bakterier og virus i serum, og tilstedeværelsen av HIV-antistoffer i serumet. Det kan også oppdage defekte proteiner. Videre er western blotting den endelige testen for hepatitt B, Creutzfeldt-Jacob sykdom, Lyme sykdom og herpes.

Likheter mellom sørlige nordlige og vestlige blotting

• Southern blotting, Northern blotting og Western blotting er tre blotting teknikker som brukes til å identifisere en bestemt type makromolekyl i en prøve.
• De tre trinnene i blottingsteknikkene er elektroforese, overføring og deteksjon.
• Hver teknikk krever denaturering og blokkering med overskytende, tilsvarende makromolekyl.
• Hver teknikk har applikasjoner innen bioteknologi og medisin.

Forskjellen mellom sørlige nordlige og vestlige blotting

Definisjon

Southern blotting refererer til en fremgangsmåte for å identifisere spesifikke sekvenser av DNA, mens Northern blotting refererer til en tilpasning av Southern blot-prosedyren som brukes til å detektere spesifikke sekvenser av RNA ved hybridisering med komplementært DNA, og Western blotting refererer til en blotting-prosedyre som brukes til å identifisere spesifikk amino -syresekvenser i proteiner.

Utviklet av

Southern blotting ble utviklet av Edward M. Southern i 1975. Northern blotting ble utviklet av Alwine og hans kolleger i 1979, og Western Blotting ble utviklet av George Starks gruppe ved Stanford University i 1979.

Molekyledetektert

Southern blotting detekterer spesifikke DNA-sekvenser, Northern Blotting detekterer spesifikke RNA-sekvenser, mens Western blotting detekterer spesifikke proteiner.

Gelelektroforese

Southern blotting involverer Agarose gelelektroforese, og Northern Blotting involverer denaturerende formaldehyd-agarosegel, mens Western blotting involverer SDS PAGE.

Blotting Method

Både sør og nordlig blotting involverer kapillær overføring, mens Western blotting innebærer en elektrisk overføring.

sonder

Southern blotting bruker DNA probes mens Northern blotting bruker cDNA probes og Western blotting bruker primære og sekundære antistoffer.

applikasjon

Southern blotting brukes til å identifisere spesifikke gensekvenser og i DNA fingeravtrykk. Northern blotting brukes i geneekspresjonsanalyse, og western blotting brukes i sykdomsdiagnose.

Konklusjon

Southern blotting identifiserer spesifikk DNA-sekvens, mens Northern blotting identifiserer spesifikk RNA-sekvens og Western blotting identifiserer spesifikk proteinsekvens i en prøve. Derfor er hovedforskjellen mellom de tre blottingteknikkene typen av makromolekylen de oppdager.

Henvisning:

1. "Southern Blotting: Princip, Procedure og Application -." ONLINE BIOLOGY NOTES, 4 desember 2017, tilgjengelig her
2. Kochunni, Deena T, og Jazir Haneef. "Northern Blotting: Princip, Procedure and Applications." Biologi Eksamen 4 U, tilgjengelig her
3. "Western Blotting Technique: Prinsipp, Prosedyre og Søknad -." BIOLOGISK ONLINE NOTER, 4. desember 2017, tilgjengelig her

Bilde Courtesy:

1. "Figur 17 01 05" Av CNX OpenStax - (CC BY 4.0) via Commons Wikimedia
2. "Northern blot diagram" Av Ilewieszoośmiornicach - Eget arbeid (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia   
3. "Western Blotting" Av Cawang - Eget arbeid (CC0) via Commons Wikimedia