Differkinome

Forskjellen mellom gramfarvning og syre rask

mikrobiologi
Share

Nøkkelforskjell - Gramfarve vs Acid Fast
  

Bakterier er svært små mikroorganismer. De er gjennomsiktige, og deteksjonen er vanskelig under levende og ubestemte forhold. Dermed er forskjellige fargemetoder utviklet for å lette bakteriedeteksjon. Det er tre hovedtyper av fargingsteknikker: enkel farging, differensial farging og strukturell farging. Differensiell farging er en teknikk som bruker mer enn en flekk for å skille bakterier. Gramfarging og syrefast flekk er mest populært kjent som differensial flekker. Gramfarging er en differensialfargingsteknikk som separerer bakterier i to grupper kjent som gram-positive bakterier og gramnegative bakterier. Den syrefaste flekken er en differensiell flekk som brukes til å identifisere syrefaste organismer som Mycobacterium fra ikke-sure faste organismer. Dette er nøkkelforskjellen mellom Gram stain og Acid Fast stain.

INNHOLD

1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er Gram Stain 
3. Hva er Acid Fast
4. Likheter mellom Gram Stain og Acid Fast
5. Side ved side-sammenligning - Gram-flekk vs syre rask i tabellform
6. Sammendrag

Hva er Gram Stain?

Gramfarging er en viktig differensialfargingsteknikk som brukes til bakteriell identifisering i mikrobiologi. Denne teknikken ble introdusert av den danske bakteriologen Hans Christian Gram i 1884. Gramfarging kategoriserer bakterier i to hovedgrupper som heter gram positive og gram negative, noe som er svært viktig ved bakteriell klassifisering og identifikasjon. Mikrobiologer utfører gramfarvning som et første trinn i bakteriell karakterisering under studiene.

Bakterier grupperes basert på forskjellene i deres cellevegg. Gram positive bakterier er sammensatt av et tykt peptidoglykan lag i deres cellevegg mens gram negative bakterier er sammensatt av et tynt peptidoglycan lag i deres cellevegg. Utfallet av gramfargingen vil være basert på forskjellen i tykkelsen av peptidoglykanlaget av celleveggen.

Gramfarging utføres ved anvendelse av fire forskjellige reagenser nemlig; primær flekk, mordant, avfarvingsmiddel og motflekk. Krystallviolet og safranin brukes som primære og motflettene, henholdsvis mens gram jod og 95% alkohol brukes som henholdsvis mordant og avfarvingsmiddel. De grunnleggende trinnene i gramflekk er som følger;

  1. En bakteriell smøring er utarbeidet på en ren glassglass, varmesett og avkjølt.
  2. Smøre er oversvømt med krystallviolett i 1 - 2 minutter.
  3. Smøre skylles med tregt vann fra springen for å fjerne overflødige flekker.
  4. Gramjod påføres smøret i 1 minutt.
  5. Smøre skylles med tregt vann fra vannet
  6. Smøre vaskes med 95% alkohol i 2 - 5 sekunder og skylles med langsomt rennende vann fra springen.
  7. Smøre er fargelagt med safranin i 1 minutt
  8. Smøre skylles med langsomt kranevann, tørkes og observeres under mikroskopet.

På slutten av gramflekken vil gramnegative bakterier bli observert i rosa farge mens gram positive bakterier blir observert i lilla farge.

Figur 01: Gram-negativ og Gram-positiv bakterier

Utfallet av gramflekken bestemmes av tykkelsen av peptidoglykanlaget i deres cellevegg. Under avfargingstrinnet blir primær flekk og mordanten lett fjernet fra gramnegative bakterier og blir fargeløse siden de har et tynt peptidoglykanlag. Den primære flekken holdes i gram positive bakterier siden de har et tykt peptidoglykan lag. Tellerfargen vil ikke være effektiv for gram positive bakterier på grunn av opprettholdelsen av den primære flekken. Dermed vil gram positive bakterier være synlige i primær flekkfarge, det vil si lilla farge. Tellerfargen vil plette de gramnegative bakteriene, og de vil være synlige i valgfarge, som er safraninfargen. Det er derfor lett å kategorisere bakterier i to grupper etter gramfarging, og det er verdifullt i bakteriell differensiering og identifikasjon.

Hva er Acid Fast?

Syrefasthet er en fysisk egenskap av visse bakterier, spesielt deres motstand mot avfarvning ved syrer under fargeprosedyrer. Når de er farget, motstår disse organismer fortynnet syre og eller etanolbasert avfargingsprosedyrer som er felles i mange fargerprotokoller. Dermed er navnet "surt fast" gitt til disse organismer. Denne egenskapen er vist på grunn av å ha et høyt voksvoksende materiale (mykolsyre) i deres cellevegger. Denne testen er kritisk for identifisering av Mycobacterium tuberculosis.

Figur 2: Acid Fast Mycobacteria

Denne syrefast flekken ble utviklet av Paul Ehrlich i 1882. Ehrlichs syrefaste teknikk ble modifisert av Ziehl-Neelsen, og den brukes nå oftere. Syre rask farging prosedyre innebærer tre forskjellige reagenser. Carbol fuschin brukes som primær flekk. Syrealkohol brukes som avfargingsmiddel. Methylenblå brukes som tellerfarge. Fargeprosedyre utføres som følger.

  1. Den primære flekken (carbol fuchsin) påføres det faste prøven på lysbildet (Alle celler blir farget i rød farge).
  2. Lysbildet oppvarmes ved damping i 5 minutter, som fører flekkene inn i cellene riktig.
  3. Deretter blir avfargingsløsningen tilsatt (dette fjerner det røde fargestoffet fra alle celler unntatt de sure raske bakteriene).
  4. Methylenblått blir tilsatt som en motfarge (det farger alle avfarvede bakterieceller).
  5. Sure raske bakterier forblir røde mens ikke-sure raske bakterier flekker i blått.

Hva er likhetene mellom Gram Stain and Acid Fast?

  • Gramfarging og syrefast er to differensielle fargingsteknikker.
  • Begge teknikkene kategoriserer bakterier i to grupper.
  • Begge teknikkene bruker to flekker og en avfarging.

Hva er forskjellen mellom gramfarvning og syre raskt?

Gram-flekk vs syre rask
Gramfarging er en differensialfargingsteknikk som separerer bakterier i to grupper Gram-positive bakterier og gramnegative bakterier. Acid Fast flekk er en differensiell flekk som brukes til å identifisere syrefaste organismer fra ikke-sure rask organismer.
Primær flekk
Krystallfiolett er den vanligste primære flekken i gramfarging. Carbol fuchsin er den primære flekken som brukes i syrefast.
Avfargingsmiddel
95% alkohol brukes som et avfarvingsmiddel i gramflekk. Syrealkohol brukes som avfargingsmiddel i syrefast.
Counter Stain
Gramflekker bruker safranin som tellerfarget. Sure rask flekk bruker metylenblått som tellerfarget.
observasjon
Gramnegative bakterier observeres i valgfarge og gram positive bakterier observeres i lilla farge. Acid Raske bakterier observeres i rød farge og ikke-sure raske bakterier observeres i blå farge.

Oppsummering - Gram Stain vs Acid Fast

Visualisering av mikroorganismer i levende tilstand er vanskelig. Derfor brukes biologiske flekker og fargingsprosedyrer mye for å studere deres egenskaper. Differensiell farging er en type fargingsteknikk som brukes til å skille bakterier. Gramfarging og syrefast flekk er to differensielle fargingsteknikker. Gramfarging skiller gram negative bakterier og gram positive bakterier basert på tykkelsen av deres cellevegger. Syr hurtig farging skiller syrefaste bakterier fra ikke-sure raske bakterier basert på mykolsyreinnholdet i cellevegget. Dette er forskjellen mellom syre rask og gram flekk.

Last ned PDF versjon av Gram Stain vs Acid Fast

Du kan laste ned PDF-versjonen av denne artikkelen og bruke den til off-line formål som per sitatnotat. Vennligst last ned PDF-versjon her Forskjellen mellom Gram Stain and Acid Fast.

referanser:

1. Aryal, Sagar. "Acid-Fast Stain-Prinsipp, Prosedyre, Tolkning og Eksempler." Online Microbiology Notes. N.p., 8. mai 2017. Web. Tilgjengelig her. 20. juli 2017.
2. Differensielle flekker for å identifisere bakterier: Gram, Acid-Fast & Endospore. N.p., n.d. web. Tilgjengelig her. 20. juli 2017.

Bilde Courtesy:

1. "Lymfeknute - Atypisk mykobakteriell infeksjon (MAI) - AFB flekk" av Yala Rosen (CC BY-SA 2.0) via Flickr
2. "Gram stain 01" Av Y tambe - Y tambe's fil (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia

mikrobiologi
×