Forskjellen mellom stablingsgel og separerende gel
Share
Nøkkelforskjell - Stacking Gel mot separering gel
Begrepene stabling av gel og separeringsgel brukes til å forklare SDS-PAGE teknikken. SDS-PAGE eller natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgelelektroforese er en laboratorieteknikk som brukes til å separere proteinmolekyler basert på deres molekylvekter. Teorien bak teknikken er at proteiner med forskjellige molekylvekter viser forskjellige migrasjonshastigheter; molekyler med lav molekylvekt migrere raskere mens molekyler med høy molekylvekt migrere sakte. Mediet for migrasjon er en gel. Det er to typer geler oppkalt som stablingsgel og separeringsgel. De nøkkelforskjell mellom stabling gel og separerende gel er det pH på stablingsgelen er 6,8 mens pH-verdien til separeringsgelen er 8,8.
INNHOLD
1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er Stacking Gel
3. Hva er separerende gel
4. Forholdet mellom Stacking Gel og Separating Gel
5. Side ved side-sammenligning - Stacking Gel mot separerende gel i tabellform
6. Sammendrag
Hva er Stacking Gel?
Stapelgel er en lavkonsentrert polyakrylamidgel som plasseres på toppen av mer konsentrert oppløsningsgel (separeringsgel) i SDS-PAGE-teknikk. Stabelgelen brukes til å forbedre oppløsningen av elektroforese. Oppløsningen øker på grunn av forskjellen mellom konsentrasjoner av stablingsgel og oppløsning av gel som påvirker proteiner i prøven. Siden konsentrasjonen av polyakrylamid i stablingsgelen er lav, er porestørrelsen høyere. Dette bidrar også til å øke separasjonen.
Stableringsgelen er en løs polyakrylamidgel med store porer på ca. 7% polyakrylamid. Disse porene virker ikke som en betydelig barriere for store proteinmolekyler. Derfor påvirker denne gelen litt på mobiliteten av disse proteinene. Dette gjør adskillelse i henhold til mobilitet og størrelse av protein ved å konsentrere dem mellom to geler.
Figur 01: SDS-PAGE akrylamidgel
PH på stablingsgelen er 6,8. PH-verdien er sur enn for oppløsning av gel med 2 pH-enheter. Denne pH-verdien innebærer en lavere ionstyrke og dermed en høyere elektrisk motstand. Dette fremkaller mobiliteten av proteiner enn andre ladede partikler som er tilstede i gelen.
Hva er separerende gel?
Separering av gel eller oppløsningsgel av en SDS-PAGEtechnique er en høyt konsentrert polyakrylamidgel som plasseres på toppen av lav konsentrert stablingsgel. Separeringsgelen inneholder en høy mengde polyakrylamid (10%). PH-verdien til denne gelen opprettholdes som pH = 8,8, som er et høyere pH-nivå enn det for stablingsgelen.
Figur 02: En gelelektroforeseanordning
Når proteinmolekylene når separeringsgelen, reduseres migrasjonen av disse molekylene fordi separeringsgelen er en høykonsentrasjonsgel med en liten porestørrelse som kan virke som en betydelig barriere for bevegelsen av proteinmolekylene. Denne sakte nedgangen tillater at de andre proteinene migrerer sakte for å fange opp, noe som resulterer i et smalt, konsentrert bånd mellom de to gelene.
Hva er forholdet mellom Stacking Gel og Separating Gel?
- Både Stacking Gel og Separating Gel typer brukes i samme apparat.
Hva er forskjellen mellom Stacking Gel og Separating Gel?
Stacking Gel vs Separating Gel | |
| Stapelgel er en lavkonsentrert polyakrylamidgel som plasseres på toppen av mer konsentrert oppløsningsgel (separeringsgel) i SDS-PAGE-teknikk. | Separering av gel eller oppløsningsgel av en SDS-PAGE teknikk er en høyt konsentrert polyakrylamidgel som plasseres på toppen av en lav konsentrert stablingsgel. |
| plassering | |
| Stablering gel settes på den oppløsende (separerende) gelen. | Separeringsgel er plassert på bunnen av beholderen som brukes for gelelektroforese. |
| Konsentrasjon | |
| Konsentrasjonen av stablingsgel er høy. | Konsentrasjonen av separerende gel er lav. |
| Polyakrylamidinnhold | |
| Stapelgel inneholder ca 7% polyakrylamid. | Separeringsgel inneholder ca. 10% polyakrylamid. |
| pH- | |
| PH på stablingsgelen er 6,8. | PH av separeringsgelen er 8,8. |
| Pore Size | |
| Store porestørrelser er tilstede i stablingsgel. | Små porestørrelser er tilstede i separasjonsgel. |
| Vedtak | |
| Stacking gel gir bedre oppløsning. | Separerende gel gir en dårlig oppløsning. |
Sammendrag - Stacking Gel vs Separating gel
Stapelgel og separeringsgel er to typer polyakrylamidgeler som brukes til å få bedre separasjon av proteinmolekyler i en gitt prøve. Forskjellen mellom stabling av gel og separasjonsgel er at pH-verdien til stablingsgelen er 6,8 mens pH-verdien av separeringsgelen er 8,8.
Henvisning:
1. "Polyakrylamidgelelektroforese". Polyakrylamidgelelektroforese (teori): Molekylærbiologi Virtual Lab II: Bioteknologi og biomedisinsk prosjektering: Amrita Vishwa Vidyapeetham Virtual Lab. Tilgjengelig her
2. "Hvordan SDS-PAGE Works." Bitesize Bio, 16. februar 2018. Tilgjengelig her
3. "SDS-PAGE stabling gel - BICH 608 (Polymenis-Pettigrew)." Google Nettsteder. Tilgjengelig her
Bilde Courtesy:
1.SDS-PAGE Acrylamide gel'By konto på engelsk Wikipedia, (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia
2.'Gel elektroforeseapparat 'Av Jeffrey M. Vinocur - Egentlig arbeid, (CC-BY 2.5) via Commons Wikimedia
