Forskjellen mellom HPLC og UPLC

De nøkkelforskjell mellom HPLC og UPLC er at HPLC tillater analyse av partikler som har sin størrelse rundt 5 mikrometer mens UPLC tillater mye mindre partikler rundt 2 mikrometer.

HPLC og UPLC er begge flytende kromatografiske teknikker som er nyttige ved separering av komponentene i en forbindelse. For å vite forskjellen mellom HPLC og UPLC, må vi først vite hva HPLC er. Dette skyldes at UPLC er en spesiell versjon av HPLC, og vi kan lett forstå det hvis vi vet hva HPLC er.

INNHOLD

1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er HPLC
3. Hva er UPLC
4. Side ved side-sammenligning - HPLC vs UPLC i tabellform
5. Sammendrag

Hva er HPLC?

Begrepet HPLC står for høy ytelse Flytende kromatografi. Det er en teknikk som vi kan bruke til å skille forskjellige bestanddeler av en forbindelse. Det er også den mest brukte teknikken for å identifisere, kvantifisere og separere komponenter i en blanding. Dessuten bruker denne teknikken et høyt trykk for å skyve løsningsmidler gjennom kolonnen. Videre er de store anvendelsene av HPLC i biokjemi for analyse av bestanddeler av en forbindelse. Det er en ideell måte å separere og identifisere aminosyrer, nukleinsyrer, proteiner, hydrokarboner, plantevernmidler, karbohydrater, antibiotika, steroider og utallige andre uorganiske stoffer.

Figur 01: HPLC-system i et laboratorium

Kort fortalt er fremgangsmåten for drift av HPLC teknikken som følger. For det første bør vi introdusere prøven i strømmen av mobil fase i diskrete små mengder ved hjelp av en pumpe. Pumpetrykket skal opprettholdes ved 40 MPa. Deretter percolerer denne strømmen av mobil fase gjennom kolonnen HPLC. Også komponentene i prøven passerer gjennom kolonnen. Imidlertid er deres bevegelseshastighet forskjellig fra hverandre. Denne forskjellen oppstår på grunn av forskjellen i samspillet mellom prøvekomponentene og adsorbenten inne i kolonnen. Vi kaller denne adsorbenten som den stasjonære fasen fordi den ligger inne i kolonnen (ikke beveger seg). For det andre, på slutten av kolonnen, kan vi samle prøven som eluerer fra kolonnen. Der kan vi bestemme forskjellene i retensjonstidene for hver komponent i prøven.

Hva er UPLC?

Begrepet UPLC står for Ultra High Performance Liquid Chromatography. Det er en variasjon av HPLC, men metoden for drift er den samme. Imidlertid, i motsetning til HPLC, tillater denne metoden at meget små partikler analyseres, slik som 2 mikrometer små partikler.

Figur 02: En UPLC-enhet

Videre gir det en raskere analyse. I denne teknikken bruker vi et 100 MPa pumpetrykk for innsetting av prøven i kolonnen. Derfor bekrefter dette høytrykk at hele prøven blir introdusert i kolonnen. Dermed er dette svært effektivt sammenlignet med HPLC.

Hva er forskjellen mellom HPLC og UPLC?

Begrepet HPLC står for høyytelsesvæskekromatografi mens termen UPLC står for Ultra High Performance Liquid Chromatography. Derfor er UPLC-teknikken en utviklet versjon av HPLC. Dermed er operasjonsmetoden den samme for begge teknikkene. UPLC er imidlertid mer effektiv sammenlignet med HPLC fordi den bruker et høyt pumpetrykk; pumpetrykket for HPLC er 40 MPA mens det er 100 MPa for UPLC. Derfor er dette en forskjell mellom HPLC og UPLC. Fremfor alt er nøkkelforskjellen mellom HPLC og UPLC at HPLC tillater analyse av partikler som har størrelse rundt 5 mikrometer mens UPLC tillater mye mindre partikler rundt 2 mikrometer.

Oppsummering - HPLC vs UPLC

UPLC er en form for HPLC. Dermed er operasjonsmetodene de samme. Men vi kan finne noen forbedrede funksjoner i UPLC sammenlignet med HPLC. Derfor er det noen forskjell mellom HPLC og UPLC. Hovedforskjellen mellom HPLC og UPLC er imidlertid at HPLC tillater analyse av partikler som har størrelse rundt 5 mikrometer mens UPLC tillater mye mindre partikler rundt 2 mikrometer.

Henvisning:

1. "High Performance Liquid Chromatography." Wikipedia, Wikimedia Foundation, 20. oktober 2018. Tilgjengelig her
2. "UPLC." Wikipedia, Wikimedia Foundation, 25. oktober 2017. Tilgjengelig her  

Bilde Courtesy:

1. "Hplc" Av Kjaergaard på English Wikipedia (Public Domain) via Commons Wikimedia 
2. "Bilde av en UPLC-enhet" Av Groep29 BFW - Eget arbeid, (Public Domain) via Commons Wikimedia