Hvorfor brukes varme i Endospore-farging
Share
En differensiell fargingsprosess brukes i farging av endosporer. Malakittgrønnen er den primære flekken som flekker både vegetative celler og endosporer i prøven. Deretter bidrar bruken av varme til å trenge inn i den primære flekken til endosporen. Etter avfarvning brukes motstain safranin til å plette bakgrunnen.
To patogene slanger kjent som Bacillus og Clostridium produserer metabolisk inaktive endosporer for å motstå negative miljøforhold. Siden endosporene forårsaker en rekke dødelige sykdommer, er identifiseringen av dem ganske viktig i kliniske prøver.
Nøkkelområder dekket
1. Hva er Endospores
- Definisjon, fakta
2. Hva er Endospore-farging
- Teknikker for Endospore-farging
3. Hvorfor brukes varme i Endospore-farging
- Bruk av varme
Nøkkelbetingelser: Endospores, Heat, Malachit Green, Pores, Vegetative Cells
Hva er Endospores
En endospor er en resistent struktur produsert av noen patogen bakteriell slægter som Bacillus og Clostridium for å overleve under ugunstige miljøforhold. Disse ugunstige forholdene kan være varme, uttørking, stråling eller kjemikalier. Prosessen med produksjon av endosporer fra vegetative celler kalles sporulering. Det kan ta 8-10 timer å fullføre prosessen. Endosporer kan ligge inne i bakteriecellen eller kan eksistere som frie sporer. Endosporedannelse er vist i Figur 1.
Figur 1: Endosporeformasjon
Endosporene er metabolisk inaktive eller sovende. De inneholder en liten mengde cytoplasma og DNA dekket av et beskyttende ytre dekk. Cellevegget består av dipikolinsyre, som gir varmebestandige egenskaper til endosporene. Endosporer sprer seg for å produsere nye organismer når miljøforholdene blir gunstige. Behandlingen av fuktig varme ved 121 ° C i 15 minutter kan ødelegge bakterielle endosporer.
Hva er Endospore-farging
Endospore-farging er en differensiell prosess for farging der forskjellige strukturer av prøven er farget i forskjellige farger. Det gjør det mulig å identifisere endosporer fra vegetative celler. Standard endospore-fargeprosessen er Schaeffer-Dulton-teknikk. Den primære flekken i denne teknikken er malakittgrønn, og motstoffet er safranin.
Schaeffer-Dulton Technique - Prosedyre
1. Etter at du har smurt på et mikroskopglass, la bakterieprøven mates med malakittgrønn-løsningen.
2. Deretter forsiktig oppvarm lysbildet i 3-5 minutter til fargestoffet begynner å fordampe.
3. La lysbildet avkjøles og vask det med vann for avfarging.
4. Til slutt, etter motstrykning, skyll lysbildet.
5. Luftrør lysbildet og observer det under et mikroskop.
Her er endosporer farget i grønt med malakittgrønne og vegetative celler er farget i rosa farge med safranin. Stained endospores med Schaeffer-Dulton teknikk er vist i figur 2.
Figur 2: Endosporer (grønn) og Vgetative celler (rosa)
En alternativ teknikk for endosporefarging kan identifiseres kjent som Doners metode. Endosporer blir farget i rødt i denne metoden.
Hvorfor brukes varme i Endospore-farging
Keratinbelegget på endosporene motstår farging. Derfor må den primære flekken bli tvunget inn i endosporen. Bruken av varme er å øke penetrasjonen av den primære flekken inn i endosporen. Lysbildet med malakittgrønt kan varmes opp i 3-5 minutter. Oppvarmingstiden er direkte proporsjonal med mengdene av fargestoffer som trengs inn i veggen av endosporene. Lengre oppvarmingstider gir porer på endosporveggen, noe som letter penetrasjonen av flere fargestoffer.
Konklusjon
Endosporer er reproduktive celler av de fleste patogene bakterier. Derfor er identifikasjonen av endosporene i en prøve kritisk i diagnostikk.
Henvisning:
1. "Endospore Stain - Forstå definisjoner, teknikker og prosedyrer." MicroscopeMaster, Tilgjengelig her.
Bilde Courtesy:
1. "Endospore Formation" Av Farah, Sophia, Alex - Eget arbeid (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia
2. "Bacillus subtilis Spore" Av Y tambe (original opplaster) - Egentlig arbeid (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia
