Southern blotting er en teknikk som brukes til påvisning av spesifikt DNA-fragment i en prøve. Blottingsteknikken innebærer separering av DNA-fragmenter basert på størrelse via gelelektroforese, overføring av størrelsesfraksjonert DNA-prøve på en filtermembran, hybridisering av de spesifikke DNA-fragmenter med en merket sekvensspesifikk probe og detektering av de merkede båndene.
I tillegg til identifisering av spesifikt DNA i en prøve, kan størrelsen og overflaten av en bestemt type DNA også bestemmes ved Southern blotting. Prosessen involvert i Southern blotting er beskrevet i denne artikkelen.
1. Hva er Southern Blotting
- Definisjon, prinsipp, applikasjoner
2. Hvordan fungerer Southern Blotting
- Prosess av Southern Blotting
Nøkkelbetingelser: DNA, Gelelektroforese, Hybridiseringsprobe, Nylonmembran, Restriksjonsfordøyelse, Southern Blotting
Southern blotting er en hybridiseringsteknikk som brukes ved identifisering av spesifikt DNA i en prøve. Teknikken ble først utviklet av Edward M. Southern i 1975. Denne prosessen identifiserer DNA-sekvenser, størrelse og overflod av en bestemt DNA-sekvens i en prøve.
En Southern blotting membran er vist i Figur 1.
Figur 1: Southern Blotting Membrane
Anvendelser av Southern blotting er beskrevet nedenfor.
Southern blotting involverer separering av DNA-fragmenter basert på størrelse via gelelektroforese, overføring av dem til en membran, hybridisering av dem med en merket sekvensspesifikk probe og detektering av de merkede båndene. Trinnene i Southern blotting er beskrevet nedenfor.
Figur 2: Southern Blotting
Hele prosessen med Southern blotting er vist i figur 2.
Southern blotting er en hybridiseringsteknikk som brukes i identifiseringen av spesifikke DNA-sekvenser fra en prøve. I denne prosessen fraksjoneres DNA-prøven av restriksjonsenzymer, og blandingen drives på en gel. Deretter overføres båndmønsteret i gelen til en nylonmembran og hybridiseres med en merket probe som tillater deteksjon av det interesserte fragmentet.
1. "Southern Blotting." Thermo Fisher Scientific, Tilgjengelig her.
1. "Southern blot membran" Av Bojan Žunar - Eget arbeid (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia
2. "Figur 17 01 05" Av CNX OpenStax - (CC BY 4.0) via Commons Wikimedia