Forskjellen mellom forbigående og stabil transfeksjon
Share
Nøkkelforskjell - Transient vs Stabil Transfection
Transfeksjon er en prosess som er involvert i genoverføringen av eukaryote celler ved hjelp av kjemiske eller fysiske metoder. Transfeksjon kan klassifiseres i to hovedtyper, kalt transient transfeksjon og stabil transfeksjon. Under transient transfeksjon feiler genet ikke med å integrere med vertsgenomet og uttrykkes temporært i verten på kort sikt, mens det i stabile transfeksjon integrerer genet med vertsgenomet og opprettholdes på lang sikt i flere generasjoners. Dette er nøkkelen forskjellen mellom forbigående og stabil transfeksjon. I begge tilfeller er transfeksjon vellykket, og gener uttrykkes.
INNHOLD
1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er transient transfeksjon
3. Hva er stabil transfeksjon
4. Side ved side-sammenligning - Transient vs Stabil Transfection
5. Sammendrag
Hva er transient transfeksjon?
Transfeksjon er et viktig verktøy for å sette gener inn i eukaryotiske celler. Blant de to transfeksjonstyper er transient transfeksjon en vanlig måte i genoverføring. Gjennom en vektor transformeres fremmede gener i vertsceller. Når fremmed DNA går inn i vertscellen, har det to alternativer. Det kan enten integrere med vertsgenomet og replikere, eller holde seg inne uten å integrere i genomet. Transient transfeksjon viser det midlertidige uttrykket av de innsatte gener uten å integrere i vertsgenomet. Gener uttrykker og produserer kodet protein til cellen deler. På grunn av integrasjonens manglende evne kan det imidlertid ikke replikere og inngå fremtidige generasjoner. Denne typen transfeksjon er vellykket i en kort periode. Under celledivisjonen eller på grunn av noen andre faktorer blir fremmed DNA utsatt for nedbrytning. Transient transfeksjon vises når det fremmede DNA er i form av høyt spolet DNA.
Figur 01: Transient Transfection
Hva er stabil transfeksjon?
Stabil transfeksjon viser vellykket fremmed genintegrasjon i vertsgenomet. Når fremmed DNA går inn i vertscellen, integrerer en del av det fremmede DNA med vertsgenomet og blir en del av det. Derfor replikerer fremmed DNA også og overgår til fremtidige generasjoner når vertsgenomet replikerer. Denne typen transfeksjon er kompleks og sjelden. På grunn av den stabile transfeksjonen i genomet, opprettholder dette trekk i en lengre periode på flere generasjoner.
Stabil transfeksjon er en vanskelig prosess og krever en effektiv tilførsel av DNA og celleoppkjøp av det fremmede DNA i dets genom. Derfor favoriserer lineært DNA den stabile transfeksjonen enn sirkulær DNA. Imidlertid er stabil transfeksjonsrate omtrent en på 104 transformerte celler. Stabil transfeksjon kan observeres ved kotransfomering av en selekterbar markør og utførelse av det kunstige utvalget på et medium.
Figur 02: Stabil transfeksjon
Hva er forskjellen mellom forbigående og stabil transfeksjon?
Transient vs Stabil Transfection | |
| Utenlandsk DNA integreres ikke i et vertsgenom. | Utenlandske DNA integreres med vertsgenomet og blir en del av det. |
| Replikasjon i verten | |
| Transiently transfekterte gener repliseres ikke innen verten. Derfor blir ikke gener overført til neste generasjoner. | Genene repliseres i verten og overføres til fremtidige generasjoner. |
| Tidsvarighet av genuttrykket | |
| Gen er uttrykt for en begrenset tidsperiode, og etter det blir de ødelagt. | Gen blir en del av genomet og uttrykkes i generasjonen i lang tid. |
| Bruk | |
| Dette er nyttig for å studere effektene av korttidsuttrykk av gener eller genprodukter. | Dette er nyttig for å studere effektene av genuttrykk på lang sikt. |
| Påvisning av transfeksjonen | |
| Gener er uttrykt og kan lett oppdages ved å sette inn et reportergen. | Stabil transfeksjon kan lett oppdages ved å sette inn en valgbar markør og velge gjennom kunstig utvelgelse på media. |
| Forekomst og prosess | |
| Transient transfeksjon er vanlig og ikke komplisert å utføre. | Stabil transfeksjon er sjelden i forekomst og kompleks å utføre. |
| DNA-type | |
| Meget supercoiled DNA er egnet for forbigående transfeksjon. | Linjært DNA er egnet for stabil transfeksjon. |
| applikasjoner | |
| Dette brukes til studier av genetisk nedbrytning eller siling med hemmende RNA, proteinproduksjon i liten skala | Dette brukes til proteinproduksjon på store, langsiktige farmakologistudier, genterapi, forskning på mekanismene til langsiktig genetisk regulering |
Sammendrag - Transient vs Stabil Transfection
Transiente og stabile transfeksjoner er to typer transfeksjoner som vises under genet overføring til eukaryote celler ved ikke-virusbaserte systemer. Transformert fremmed DNA er ikke integrert med vertsgenomet i forbigående transfeksjon mens den integreres med vertsgenomet i stabil transfeksjon. Sirkulært spolet DNA er vist forbigående transfeksjon, mens lineært DNA foretrekker stabil transfeksjon. Dette er forskjellen mellom forbigående og stabil transfeksjon. Imidlertid er forbigående transfeksjon mer vanlig og lett sammenlignet med stabil transfeksjon. Men valget av en blant to avhenger av formålet med genoverføringen og varigheten av forskningsprosjektet.
referanser:
1. Condreay, J. Patrick, Sam M. Witherspoon, William C. Clay, og Thomas A. Kost. "Transient og stabilt genuttrykk i pattedyrceller transdusert med en rekombinant baculovirusvektor." Fremgangsmåter av Nasjonalt akademi for vitenskap i USA. Nasjonalt vitenskapsakademi, 5. januar 1999. Web. 25. mars 2017
2. Kim, Tae Kyung og James H. Eberwine. "Mammal celletransfeksjon: nåtiden og fremtiden." Analytisk og bioanalytisk kjemi. Springer-Verlag, august 2010. Web. 25. mars 2017
