Forskjellen mellom SDS Page og Western Blot
Share
Nøkkelforskjell - SDS Page vs Western Blot
Western blotting er en teknikk som oppdager et spesifikt protein fra en proteinprøve. Denne teknikken utføres via flere sentrale trinn: gelelektroforese, blotting og hybridisering. Natriumdodecylsulfatpolyakrylamidgelelektroforese (SDS Page) er en slags gelelektroforese-teknikk som brukes til å separere proteiner i henhold til deres størrelser (molekylvekter). Western blot er et spesielt ark med en blottemembran som brukes til å overføre det samme mønsteret av proteiner i SDS-siden. Hovedforskjellen mellom SDS Page og western blot er det SDS-side tillater separasjon av proteiner i en blanding samtidig som western blot tillater deteksjon og kvantifisering av et spesifikt protein fra en blanding. Begge er nyttige i proteinanalysestudier.
INNHOLD
1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er SDS-siden
3. Hva er Western Blot
4. Side ved side sammenligning - SDS Page vs Western Blot
5. Sammendrag
Hva er SDS-siden?
SDS Page er en gelelektroforese-teknikk som brukes til proteinseparasjon. Det brukes vanligvis i biokjemi, genetikk, forensikk og molekylærbiologi. Når proteinene er ekstrahert fra prøven, kjøres de på en gel bestående av SDS og polyakrylamid. SDS er et anionisk vaskemiddel som brukes til å linearisere proteiner (denatureringsproteiner) og å gi en negativ ladning til lineære proteiner proporsjonal med molekylmassen. Polyakrylamid blir den faste bæreren for gelen. Denaturerte proteiner som er negativt ladet migrere mot den positive enden av apparatet gjennom gelen. I henhold til proteinstørrelsene varierer migreringshastigheten mellom proteiner og separasjon oppstår. Derfor er SDS-siden nyttig for separering av individuelle proteiner basert på deres størrelser.
Fremstillingen av polyakrylamidgelen for fraksjonering av proteiner er et avgjørende trinn i SDS Page. Den riktige konsentrasjonen av polyakrylamid og typen av tverrbindingsmidlet som brukes, påvirker sterkt de fysiske egenskapene til gelen, noe som gjør den faktiske separasjonen av de forskjellige proteinene. Porestørrelsene på gelen skal håndteres riktig for effektiv separasjon. Imidlertid vurderes SDS Page som en høyoppløselig proteinseparasjonsteknikk.
SDS Page-teknikk har en stor begrensning i proteinanalyse. Siden SDS denaturerer proteiner før separasjon tillater det ikke deteksjon av enzymatisk aktivitet, proteinbindingsinteraksjoner, proteinkofaktorer osv..
Figur 01: SDS-side
Hva er Western Blot?
Western blotting-teknikk muliggjør deteksjon av et spesifikt protein fra en proteinblanding og måling av proteinets mengde og molekylvekt. Western blot er membranen som brukes under blottingprosedyren for å få speilbildet av proteinmønstrene i SDS-polyakrylamidgelen. Membranen som brukes til western blotting består for det meste av nitrocellulose eller polyvinyliden-difluorid (PVDF). Membranen med det overførte proteinet kan brukes til å identifisere det ønskede protein. Det krever høy kvalitet antistoff for påvisning av det ønskede protein ved hybridisering. Antistoffet binder seg til sitt spesifikke antigen og avslører tilstedeværelsen av det ønskede antigen som er et protein.
Overføring av proteiner fra SDS-polyakrylamidgelen til den vestlige blottet utføres ved elektroblotting. Det er en effektiv og rask metode som får proteiner til å elektrofores ut av gelen og overføres til nitrocellulosemembranen (western blot).
Figur 02: Western Blot
Hva er forskjellen mellom SDS Page og Western Blot?
SDS Side vs Western Blot | |
| SDS Page er en gelelektroforese-teknikk. | Western blot er en teknikk som utføres på en membran for å oppdage et bestemt protein fra en blanding. |
| Bruk | |
| SDS-side muliggjør separasjon av proteiner i henhold til deres størrelser. | Western blot tillater overføring av proteiner på SDS-siden gel uten å endre mønsteret og tillater hybridisering med spesifikke antistoffer. |
| ulemper | |
| Protein denaturering, høy kostnad og tilstedeværelse av nevroksoksinkjemikalier er ulempene med denne teknikken. | Denne teknikken er tidkrevende og krever gode erfarne personlige og spesifikke kontrollerte forhold. |
Sammendrag - SDS Side vs Western Blot
SDS side og western blot er to metoder involvert i proteinanalyse. SDS-side muliggjør enkel separasjon av proteiner på en gel i henhold til deres molekylvekt. Western blot bidrar til å bekrefte tilstedeværelsen og mengden av et bestemt protein gjennom hybridisering med spesifikke antistoffer. Dette er forskjellen mellom SDS Page og western blot.
referanser:
1. Blancher, C. og A. Jones. "SDS-PAGE og Western Blotting Techniques." Metoder i molekylær medisin. U.S. National Library of Medicine, n.d. Web. 27. mars 2017
2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig, og David H. Petering. "Native SDS-PAGE: Høyoppløselig elektroforetisk separasjon av proteiner med retensjon av native egenskaper, inkludert bundet metallononer." Metallomikk: integrert biometalfag. U.S. National Library of Medicine, mai 2014. Web. 27. mars 2017.
Bilde Courtesy:
1. "SDS-PAGE Electrophoresis" av Bensaccount på engelsk Wikipedia (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia
2. "Western blot 114A" Av Amanthabagdon - Eget arbeid (Public Domain) via Commons Wikimedia
