Forskjellen mellom Phusion og Taq Polymerase

Nøkkelforskjell - Phusion vs Taq polymerase
 

DNA-polymeraser er mye brukt enzymer i molekylærbiologi teknikker og er også naturlig tilstede i alle organismer som gjennomgår DNA-replikasjon. De er de viktigste polymeriserende enzymer som involverer under replikering. DNA-polymerase er i stand til å legge til nukleotider til den frie 3'-enden av DNA-strengen og derved forårsake forlengelsen av en ny streng. På grunn av utviklingen av molekylærbiologi i sykdomsdiagnostikk og industrielle anvendelser er det for tiden viktig å fremstille polymeraser med forskjellige fordelaktige egenskaper. Dette øker nøyaktigheten av metoden og gjør det til en raskere teknikk. Phusion og Taq polymerase er to kommersielt produserte termostabile polymerase enzymer som brukes i spesielle molekylære applikasjoner. Phusion er en DNA-polymerase isolert fra Pyrococcus furiosus og brukes hovedsakelig i kloning eksperimenter for å øke troigheten. Taq DNA-polymerase er standard-DNA-polymerasen anvendt i polymerasekjedereaksjonen (PCR), og den er isolert fra den termostabile bakterien; Thermus aquaticus. De nøkkelforskjell mellom de to enzymer er kildemikroorganismen. Phusion er isolert fra ekstremophilen, Pyrococcus furiosus mens Taq-polymerase er isolert fra termofilen, Thermus aquaticus.

INNHOLD

1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er Phusion
3. Hva er Taq Polymerase
4. Likheter mellom Phusion og Taq Polymerase
5. Side ved side-sammenligning - Phusion vs Taq Polymerase i tabellform
6. Sammendrag

Hva er Phusion?

Phusion DNA polymerase er en ny polymerase som er produsert ved å isolere enzymet fra Pyrococcus furiosus, som er en ekstremofil Archaea. Disse mikroberene ligger i ekstremt høy temperaturforhold, hvorved polymerasen blir en svært varmestabil polymerase. Fusjonspolymerase brukes for å oppnå ekstrem troskap over den konvensjonelle termostabile polymerasen; Taq polymerase. Fusjonspolymerase er i stand til å amplifisere lange maler opp til 7,5 kb genomisk DNA. Den optimale polymeriseringskapasiteten til Phusion polymerase er ved 72⁰ C. Phusion brukes også i kloning av produkter for sekvensering, ekspresjonsanalyse og mutasjonsanalyse.

Phusjons DNA-polymerase har 3 '- 5' exonukleaseaktiviteten. Dette tillater korrekturlesning av den nylig syntetiserte strengen etter syntesen. Derfor kan nukleotidmanglene lett repareres. Dermed har den en mindre feilrate. Samlet fordeler med Phusion polymerase er;

• Extreme Fidelity
• Høy hastighet og redusert forlengetid
• Robuste Reaksjoner og krever minimal optimalisering
• Høy avkastning

Figur 01: Fusjon

Den største ulempen ved Phusion polymerase er at den hemmeres i nærvær av deoksyuridintrifosfat (dUTP). Når dUTPs akkumuleres i reaksjonsblandingen, kan det hemme virkemidlene av Phusion polymerase. Dette forhindres ved å behandle reaksjonsblandingen med dUTPase før tilsetning av enzymet. I dag brukes en dUTP-resistent variant av Phusion-polymerase kjent som Pfu Turbo i stedet for Phusion polymerase som et middel til dette problemet.

Hva er Taq Polymerase?

Taq DNA-polymerase Oppfinnelsen har revolusjonert feltet molekylærbiologi. Det løste et stort problem i DNA-amplifikasjon. Taq DNA-polymerase er et varmestabilt polymeraseenzym ekstrahert og isolert fra den termofile bakterien, Thermus aquaticus. Oppdagelsen av disse enzymer fører til utviklingen av PCR. Dette enzymet har muliggjort bruk av polymerasekjedereaksjon i DNA-amplifikasjon i stedet for konvensjonelle arbeidskrevende kloningsteknikker. PCR brukes nå i molekylær diagnostikk, landbruks- og industriområder med mange nye variasjoner som legges til teknikken.

Figur 02: Taq Polymerase

Taq DNA-polymerase fungerer ved det optimale temperaturområdet mellom 72⁰C - 80⁰C. Taq DNA-polymerase krever en ko-faktor; magnesium for sin funksjon. Taq-polymerase har ikke 3'-5'-korrekturlesingsevnen, derfor er feilraten for Taq DNA-polymerase høy i sammenligning med flere nyere typer DNA-polymeraser, så som Phus-polymerase etc. Men populariteten til Taq DNA-polymerase forblir den samme over hele verden av vitenskap på grunn av bekvemmeligheten og fleksibiliteten til enzymet.

Hva er likhetene mellom Phusion og Taq polymerase?

• Både Phusion og Taq polymerase enzymer er polymeriserende enzymer som er i stand til å legge til nukleotider til den 3 'frie enden av DNA-strengen.
• Både Phusion og Taq polymeraser krever en primer-sekvens for å initiere polymerisasjon.
• Både Phusion og Taq polymeraser er varmestabile.
• Både Phusion og Taq-polymeraser blir brukt i PCR-mekanismer for å amplifisere DNA.
• Når polymerasen tilsettes til reaksjonsblandingen, tilsettes både Phusion og Taq polymeraser sist for å sikre enzymets effektivitet.
• Både Phusion og Taq polymeraser syntetiseres kommersielt for molekylærbiologiske eksperimentelle formål.
• Både Phusion og Taq polymeraser krever en koaktor for å fullføre sin funksjon.

Hva er forskjellen mellom Phusion og Taq Polymerase?

Phusion vs Taq Polymerase
Phusion er en DNA-polymerase isolert fra Pyrococcus furiosus og brukes hovedsakelig i kloning eksperimenter for å øke troigheten.	Taq DNA-polymerase er standard-DNA-polymerasen som anvendes i polymerasekjedereaksjonen (PCR), og den er isolert fra den termostabile bakterien, Thermus aquaticus.
Kildeorganisme
Phusion ekstraheres fra ekstremofil arkea - Pyrococcus furiosus.	Disse litterære arbeider spenner fra koloniseringsperioden til dekoloniseringsperioden.
Bevisavlesning
3 '- 5' bevislesingsevne er tilstede i Phusion.	3 '- 5' bevislesingsevne er fraværende i Taq-polymerase.
gjengivelse
Høy troskap er der med Phusion.	Taq polymerase viser lav troskap.
Amplification
Phusion er i stand til å amplifisere lange DNA-fragmenter.	Taq-polymerase er i stand til å amplifisere mye kortere DNA-fragmenter.
DUTP-forgiftning
Fusjonsvirkning er hemmet av akkumuleringen ulik.	Taq-polymerase er ikke hemmet av dUPT.

Sammendrag - Phusion vs Taq polymerase

Phusion og Taq DNA-polymerase er to varmestabile polymeraser som brukes i PCR-teknikker. Phusion er en polymerase isolert fra ekstremofilen, Pyrococcus furiosus mens Taq er isolert fra de termostabile bakteriene Thermus aquaticus. Taq DNA-polymerase-oppdagelse fører til PCR-oppfinnelsen. Phusion har mange fordeler i forhold til Taq som har gjort Phusion til et bedre alternativ i produksjon av high-fidelity DNA. Imidlertid er Taq-polymerase fortsatt brukt som standardpolymeraseenzymet i PCR. Dette er forskjellen mellom Phusion og Taq polymerase.

Henvisning:

1.Biolabs, New England. "Taq DNA Polymerases." New England Biolabs: Reagenser for Life Sciences Industry. Tilgjengelig her  
2. "Phusion DNA Polymerase." New England Biolabs. Tilgjengelig her 

Bilde Courtesy:

1. 'GAM illustrert av Nivin Nasri'By NivinN - Egentlig arbeid, (CC BY-SA 4,0) via Commons Wikimedia  
2.'Taq'By Adenosine - Eget arbeid, (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia