Forskjellen mellom immunfluorescens og immunhistokjemi
Share
Nøkkelforskjell - Immunofluorescens vs Immunohistokjemi
Sykdomsdiagnostikk, som bruker molekylærbiologiske metoder, har blitt et fremvoksende område av den kliniske laboratorieteknologien. Den inkluderer alle tester og metoder for å identifisere en sykdom og forstå årsaken til en sykdom ved å analysere DNA, RNA eller uttrykte proteiner i en organisme. Raske fremskritt innen molekylær diagnostikk har gitt grunnleggende forskning om smittsomme og ikke-smittsomme sykdommer. Disse brukes til å bestemme endringer i sekvens eller ekspressionsnivåer i viktige gener eller proteiner involvert i sykdom. Immunofluorescens (IF) og immunhistokjemi (IHC) er to så vidt brukte teknikker i kreftbiologi. IF er en type IHC hvor en fluorescensdeteksjonsmetode brukes til å analysere monoklonale og polyklonale antistoffer, mens IHC bruker kjemiske baserte metoder for å oppdage de monoklonale og polyklonale antistoffene. Dette er nøkkelen forskjellen mellom IF og IHC.
INNHOLD
1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er immunfluorescens
3. Hva er immunohistokjemi
4. Likheter mellom immunfluorescens og immunhistokjemi
5. Side ved side-sammenligning - Immunofluorescens vs Immunohistokjemi i tabellform
6. Sammendrag
Hva er immunfluorescens (IF)?
Immunofluorescens er en deteksjonsteknikk hvor antistoffene som brukes i analysen, er merket med fluorescerende fargestoffer eller fluorescerende proteiner for deteksjonsformålet. Merkede sekundære antistoffer kan resultere i uønskede bakgrunnssignaler; Derfor er IF-teknikken basert på merking av det primære antistoffet selv for tiden for å unngå uønskede signaler under deteksjon. Gjennom denne teknikken forhindres ikke-spesifikk binding mellom primær og sekundær antistoff, og det er raskere da det ikke er noen sekundær inkubasjonstrinn involvert. Datakvaliteten er også forbedret.
Figur 01: Dobbelt immunofluorescensfarging for BrdU, NeuN og GFAP
Fluorkromer eller fluorescerende fargestoffer er forbindelser som kan absorbere stråling, helst ultrafiolett stråling som er begeistret. Når partiklene når grunntilstanden fra den opphissede tilstanden, avgir de stråling som er fanget og detektert av en detektor for å danne et spektrum. Det er av stor betydning at den fluorescerende etiketten er kompatibel og stabil for den spesielle reaksjonen, og den bør være riktig konjugert til antistoffet for å oppnå nøyaktige resultater. Et av de mest brukte fluorokromene er fluoresceinisotiocyanat (FITC), som er av grønn farge, med henholdsvis absorpsjons- og utslippstoppbølgelengder på henholdsvis 490 nm og 520 nm. Rhodamine, et annet middel som brukes i IF, er rødt i fargen og har tydelige absorpsjons- og utslippstoppbølgelengder på 553 nm og 627 nm.
Hva er immunhistokjemi (IHC)?
IHC er en molekylær testing metode praktisert for å identifisere og bekrefte nærværet av antigenet i målcellen. Målcellen kan være en smittsom partikkel, et mikrobielt patogen eller en malign tumorcelle. IHC benytter monoklonale og polyklonale antistoffer for å bestemme tilstedeværelsen av antigener tilstede på celleoverflaten av målceller. Teknikken er basert på antigen-antistoff-binding. En deteksjonsmarkør er konjugert til disse antistoffene for å oppdage nærværet eller fraværet av det spesielle antigenet. Disse markørene kan være kjemiske markører som enzymer, fluorescens-merkede antistoffer eller radio-merkede antistoffer.
Figur 02: Mus-hjerne skive farget av immunohistokjemi
Den mest populære anvendelsen av IHC er i kreftcellebiologi for å identifisere tilstedeværelsen av ondartede svulster, men den brukes også til å påvise infeksjonssykdommer.
Hva er likhetene mellom immunfluorescens og immunhistokjemi?
- Immunofluorescens og immunhistokjemi finner sted under in vitro-forhold.
- Begge teknikkene er basert på antigen-antistoffet
- Begge er veldig raske teknikker.
- Resultatene av teknikkene er reproduserbare.
- Begge har forbedret datakvalitet.
- Disse teknikkene brukes i diagnostikk for kreft og smittsomme sykdommer.
Hva er forskjellen mellom immunfluorescens og immunhistokjemi?
Immunofluorescens vs Immunohistokjemi | |
| IF er en deteksjonsteknikk hvor antistoffene som anvendes i analysen er merket ved å bruke fluorescerende fargestoffer eller fluorescerende proteiner for deteksjon. | IHC er en deteksjonsteknikk hvor antistoffene som brukes i analysen, er merket med kjemikalier eller radioaktive elementer for deteksjon. |
| nøyaktighet | |
| Nøyaktighet er høyere i IF-teknikk sammenlignet med IHC. | Nøyaktigheten er lavere i IHC. |
| spesifisitet | |
| IF er mer spesifikk. | IHC er mindre spesifikk. |
Sammendrag - Immunofluorescens vs Immunohistokjemi
Molekylære mekanismer har ført til mange endringer innen medisin, noe som resulterer i avanserte molekylære testmetoder som har ført til revolusjoner innen diagnostikk. Disse oppfinnelsene har ført til rask og nøyaktig identifisering og bekreftelse av sykdommen, og derved muliggjør vellykket administrasjon og produksjon av narkotika. Disse teknikkene brukes også i farmakologi for å finne målene med narkotika og for å bekrefte farmakokinetiske egenskaper ved legemetabolismen. IF og IHC er to diagnostiske metoder som er basert på begrepet antigen og antistoffbinding, selv om deteksjonsmåten i begge teknikkene er forskjellig. IF bruker prinsippet om fluorescens for å oppdage antigenet og IHC bruker begrepet kjemisk konjugering for å oppdage antigenet. Dette er forskjellen mellom IF og IHC.
Last ned PDF-versjonen av immunfluorescens vs immunhistokjemi
Du kan laste ned PDF-versjonen av denne artikkelen og bruke den til off-line formål som per sitatnotat. Vennligst last ned PDF-versjon her Forskjellen mellom immunfluorescens og immunhistokjemi.
referanser:
1. Aoki, Valéria, et al. "Direkte og indirekte immunofluorescens." Anais Brasileiros de Dermatologia, SociedadeBrasileira de Dermatologia, Tilgjengelig her. Tilgang 25. august 2017.
2. Duraiyan, Jeyapradha, et al. "Anvendelser av immunhistokjemi." Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, aug. 2012, Tilgjengelig her. Tilgang 25. august 2017.
Bilde Courtesy:
1. "Dobbel immunofluorescensfarging for BrdU, NeuN og GFAP" Ved Ma M, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, Fan X, Xu G, Frey WH 2, Liu X. - Intranasal levering av transformerende vekstfaktor- beta1 i mus etter slag reduserer infarktvolumet og øker neurogenese i subventricular sonen; PMID 19077183 (CC BY 2.0) via Commons Wikimedia
2. "Hypothalamus av et muskelvev farget av ABC-Immunohistokjemi" Ved zabbn - Eget arbeid (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia
