Forskjellen mellom HPLC og hurtig HPLC

De nøkkelforskjell mellom HPLC og hurtig HPLC er det pumpetrykket som vi bruker til HPLC, er rundt 40 MPa mens pumpetrykket for hurtig HPLC er rundt 3-5 MPa.

Den vanligste teknikken vi bruker for å skille komponenter av en blanding er "væskekromatografi". Det er flere teknikker for å oppnå denne hensikten, hvorav HPLC er svært populær. HPLC står for High Performance Liquid Chromatography som identifiserer, kvantifiserer og separerer komponenter av en flytende blanding på en rask og effektiv måte. Rask HPLC er en spesiell applikasjon av HPLC som for sent har fått oppmerksomheten til de som er involvert i studien av løsninger.

INNHOLD

1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er HPLC
3. Hva er rask HPLC
4. Side ved side-sammenligning - HPLC vs Fast HPLC i tabellform
5. Sammendrag

Hva er HPLC?

HPLC er høyytelsesvæskekromatografi. Det benytter et høyt trykk for å presse løsningsmidler slik at de passerer gjennom en kolonne. Det er også en ideell måte å skille og studere forskjellige forbindelser som aminosyrer, nukleinsyrer, karbohydrater, steroider, antibiotika og hydrokarboner. HPLC har mange fordeler i forhold til andre metoder for separering av blandinger som høyere oppløsning og raskere analyse. Det utelukker behovet for ompakning og regenerering og gir bedre kontroll over parametere og dermed økning av effektiviteten av separasjon. Ideelt sett passer HPLC til store applikasjoner, da det kan skille svært små partikler og tillater bruk av høytrykk som gjør det enkelt for løsningsmidler å flyte lett.

Figur 01: HPLC-kolonne

Kort fortalt er fremgangsmåten for drift av HPLC teknikken som følger. Først bør vi introdusere prøven i strømmen av mobilfase i diskrete små mengder ved hjelp av en pumpe. Pumpetrykket skal opprettholdes ved 40 MPa. Denne strømmen av mobil fase perkolerer gjennom kolonnen HPLC. Da passerer komponentene i prøven også gjennom kolonnen. Imidlertid varierer deres bevegelseshastighet fra hverandre på grunn av forskjellen i samspillet mellom prøvekomponentene og adsorbenten inne i kolonnen. Vi kaller denne adsorbenten som den stasjonære fasen fordi den ligger inne i kolonnen (ikke beveger seg). Da, i enden av kolonnen, kan vi samle prøven som eluerer fra kolonnen, slik at vi kan samle komponentene i prøven separat.

Hva er rask HPLC?

Nylig forsket forskere ved Schering Plough forskningsinstitutt utviklet en rask HPLC teknikk som er en avansert versjon av HPLC, da det muliggjør enda raskere separasjon av forbindelser fra en blanding. Også kjent som hurtig HPLC, benytter denne teknikken en 2,7um kondensert kjerne-silikapartikler som fremstilles ved å smelte 0,5um porøst silika over en fast silikapartikkel. Disse unikt laget partikler gjør separeringsprosedyren veldig rask og det også ved lavt trykk enn det vi bruker i HPLC.

Figur 02: FPLC Apparatus

Rask HPLC gir resultater som er sammenlignbare med UPLC, men forskere mener at denne teknikken er overlegen, da det ikke krever veldig dyrt ultrahøyt trykkutstyr. Det som er flott er at rask HPLC ikke krever noen nye laboratorieprotokoller.

Hva er forskjellen mellom HPLC og Fast HPLC?

HPLC er høyytelsesvæskekromatografi og hurtig HPLC er en avansert form av høyytelsesvæskekromatografi. Hovedforskjellen mellom HPLC og hurtig HPLC er at pumpetrykket som vi bruker til HPLC, er rundt 40 MPa. Mens pumpetrykket for hurtig HPLC er rundt 3-5 MPa. Videre kan vi skille forskjellige forbindelser som aminosyrer, nukleinsyrer, karbohydrater, steroider, antibiotika og hydrokarboner ved hjelp av HPLC-teknikken, mens den raske HPLC-teknikken hovedsakelig brukes til separasjon av proteiner.

Nedenfor infographic presenterer mer informasjon om forskjellen mellom HPLC og hurtig HPLC.

Oppsummering - HPLC vs Fast HPLC

HPLC er en væskekromatografisteknikk som har blitt svært populær over hele verden. Rask HPLC er en ny versjon av HPLC, forskere ved Schering Plough Institute utviklet denne nye teknikken. Hovedforskjellen mellom HPLC og hurtig HPLC ligger på pumpetrykket som vi bruker til separasjonen. Det er; pumpetrykket som vi bruker til HPLC er rundt 40 MPa. Men pumpetrykket for rask HPLC er rundt 3-5 MPa.

Henvisning:

1. "High Performance Liquid Chromatography." Wikipedia, Wikimedia Foundation, 20. oktober 2018. Tilgjengelig her 
"Du trenger et fancy system for å kjøre rask HPLC - eller gjør du?" Rask HPLC - CHROMacademy. Tilgjengelig her  

Bilde Courtesy:

1. "HPLC kolom" Door Jmave, rcvanwijk - Eigen werk, (Public Domain) via Commons Wikimedia  
2. "Lab's FPLC" Av Stephen Helms fra Dallas, TX, USA - Our Labs FPLC, (CC BY-SA 2.0) via Commons Wikimedia